猪DECR1和GPR81基因转录调控的研究

【摘要】猪肉品质作为猪育种工作中的重要经济性状之一,已经成为育种工作者关注的重点。众所周知,脂肪性状是影响猪肉品质的重要因素,对其进行深入研究将有助于我们找到改善猪肉品质的方法。为此,本试验对影响脂肪性状的两个基因的转录调控机制进行了初步研究,以揭开其转录调控原理的面纱,为下一步的研究奠定基础。本试验主要从以下几个方面对DECR1基因和GPR81基因的转录调控机制进行了研究：(1)通过QT-PCR技术对GPR81基因在大白猪的各个组织表达情况进行定量研究,得出GPR81基因在脂肪、肝脏以及肾脏组织中高表达,其中脂肪组织中表达量最高,其他组织中微量表达或不表达。(2)通过NCBI和EBI数据库查询得到DECR1、GPR81基因5’端上游大约2000bp的调控序列,并对其进行PCR克隆,分别获得2099bp、1798bp的序列。利用生物信息学技术分别对这两个基因的5’端上游转录调控区域进行了预测分析,发现DECR1基因5’端上游转录调控区域内存在AP1、SP1、MZF1等多种常见的转录因子结合位点。对CpG岛分布情况分析,发现没有CpG岛存在；在GPR81基因5’端上游转录调控区域发现有GATA-1、GATA-2、GATA-X、SRY、AML-1α等高分值转录因子结合位点。同样,在GPR81基因5’端上游转录调控区域也没有发现CpG岛存在。(3)对DECR1、GPR81基因5’端上游序列设计一系列缺失片段,构建各个缺失片段的双荧光素酶报告基因载体,并分别在C2C12、3T3-L1、PK15细胞中进行双荧光素酶活性检测。分别对DECR1基因的DP7缺失片段和GPR81基因的GP7缺失片段进一步构建缺失载体,继续进行双荧光活性检测。(4)对双荧光活性测定结果进行分析,并对双荧光素酶活性差异显著的缺失片段间的序列进行生物信息学预测,找出对启动子转录活性起重要调控作用的转录调控因子。通过TFSearch软件对这两个基因进行预测,发现SP1、MZF1转录调控因子和GATA1、GATA2、GATAx转录调控因子可能分别对DECR1基因和GPR81基因启动子具有显著地调控作用。(5)为了进一步鉴定DECR1和GPR81基因5’端上游转录调控区域内的转录因子结合位点和相应的转录因子,我们对这两个基因各个转录因子结合位点进行定点突变,并对DECR1基因的转录因子SP1和GPR81基因的转录因子GATA1进行超表达实验进行验证,此外对SP1转录因子进行siRNA干扰试验验证。结果显示突变后DECR1和GPR81基因5’端上游转录调控区域转录活性显著降低；分别对DECR1基因和GPR81基因超表达SP1和GATA1转录因子,显著地增强了这两个基因5’端上游转录调控区域转录活性；siRNA干扰片段显著地降低了DECR1基因5’端上游转录调控区域转录活性。
【作者】张召雷；
【导师】熊远著；
【作者基本信息】华中农业大学，动物遗传育种与繁殖，2014，硕士
【关键词】猪肉品质；脂肪性状；DECR1；GPR81；启动子；转录因子；

【参考文献】
[1]杨锦.论我国领导干部财产申报制度的完善[D].东北大学,中外政治制度,2010,硕士.
[2]李晋霄.民国年间婚姻关系解除探究[D].河北师范大学,中国近现代史,2012,硕士.
[3]杨广.基于无人车的道路破损识别与程度评估技术研究[D].沈阳理工大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[4]沈红梅.沪市上市公司自愿性信息披露与公司特质相互关系的实证研究[D].浙江大学,技术经济及管理,2003,硕士.
[5]张晓丽.甘露饮加减治疗湿热阴伤型2型糖尿病临床疗效观察[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[6]黄睿.基于Java技术的ORM工具接口的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2012,硕士.
[7]韩雪.“那叫一个X”格式分析[D].吉林大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[8]杨红煜.心肌收缩力下降时T值变化的实验研究[D].大理学院,内科学,2013,硕士.
[9]豆传秀.基于网络—横道计划法的道路工程进度—成本控制研究[D].成都理工大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[10]童永全.通海烟区植烟土壤主要养分状况及土壤改良策略研究[D].湖南农业大学,作物学,2012,硕士.
[11]王明道,陈红歌,刘新育,高玉千,吴坤,贾新成.地黄对芝麻的化感作用及其化感物质的分离鉴定[J].植物生态学报,2009,06:1191-1198.
[12]谢双双.新农村建设背景下的农民政治认同建构[D].湖南师范大学,政治学理论,2013,硕士.
[13]袁启明.隐形眼镜的近忧远虑[J].医疗保健器具.1999(03)
[14]谷婷婷.我国民事诉讼行为保全制度研究[D].广西民族大学,民事诉讼法,2013,硕士.
[15]国敢.“2002年中国IT用户年会”在京召开[J].铁路计算机应用,2002,11:36.
[16]冯东.我国银行业顺周期性及其缓冲工具研究[D].天津财经大学,金融学,2012,硕士.
[17]刘佳.相位编码QKD中的相位补偿方法研究[D].西北大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[18]李永艳,李晓玲.将数学建模与独立学院的数学教学相结合[J].科技视界,2014,30:67+306.
[19]谢振东.产业集群背景下企业社会网络与创业绩效的关系研究[D].浙江大学,2007.
[20]余博,刘小龙,任兴武,李柏松.年产10万吨发动机铸件车间设计[J].中国铸造装备与技术,2015,02:51-56.
[21]季文静.网络消费者购买意愿影响因素研究[D].山东大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[22]姚敏.“90后”组织社会化的影响因素与影响效果研究[D].华东理工大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[23]张超.烟台当代京剧口述史[D].中国艺术研究院,音乐学,2014,硕士.
[24]高超群.基于GNSS-R的Nearly-Linear土壤湿度反演模型[D].中北大学,精密仪器及机械,2014,硕士.
[25]丁雪娇.融资融券担保法律制度研究[D].河北经贸大学,民商法,2014,硕士.
[26]胡越.北京市生鲜水果配送资源整合研究[D].北京交通大学,2014.
[27]袁伟.含多孔或夹杂电致伸缩材料二维问题研究[D].南京航空航天大学,工程力学,2013,硕士.
[28]唐成程.利用TALEN技术对家兔CCR5和猪Albumin基因进行靶向修饰[D].吉林大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[29]李恒贺.船用高强钢三明治板激光焊接接头的组织和海水腐蚀性能[D].兰州理工大学,材料加工工程,2014,硕士.
[30]王淑娟.基于数据仓库的税收分析预测系统的研究与设计[D].山东科技大学,2004.
[31]赵明雪.金融脱媒背景下我国城市商业银行并购研究[D].山东财经大学,金融学,2014,硕士.
[32]程跃.中药制药过程控制及集成化生产若干关键问题研究[D].西南交通大学,2010.
[33]万礼.四川省生物制药产业的发展战略[D].西南交通大学,工商管理,2003,硕士.
[34]马昆.城市高龄老人生活照料问题的个案研究[D].山东大学,社会工作（专业学位）,2013,硕士.
[35]张海江.中国水墨画仿真中几个关键问题的研究[D].天津大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[36]甘甜.河西走廊地区新型农村社区设计初步研究[D].兰州理工大学,建筑与土木工程,2014,硕士.
[37]万倩.高中生英语语法学习策略的调查研究[D].华中师范大学,学科教学,2014,硕士.
[38]赵晓雪.基于Mashup技术的地理信息服务平台的研究[D].华中师范大学,地图学与地理信息系统,2014,硕士.
[39]李育聪.锦2-6-9区块于楼油层沉积微相研究[D].东北石油大学,矿产普查与勘探,2013,硕士.
[40]徐云志.直接消耗系数的最优调整[D].山东大学,运筹学与控制论,2013,硕士.
[41]杨莼.《毛泽东思想和中国特色社会主义理论体系概论》翻译实践报告[D].北京交通大学,2014.
[42]赵彩霞.强冬性白菜型冬油菜化学杀雄与杂种优势利用研究[D].甘肃农业大学,作物遗传育种,2013,硕士.
[43]贾晓舟.中国“垃圾短信”法律治理探究[D].吉林大学,法律,2013,硕士.
[44]王学宝,李晋庆,罗运军.石墨烯/环氧树脂复合材料的制备及力学性能[J].高分子材料科学与工程,2013,07:161-165.
[45]蔡月飞.熔石英亚表面微裂纹对其损伤增长行为的影响[D].哈尔滨工业大学,物理电子学,2013,硕士.
[46]南将胜.论我国股份有限公司的股东表决权制度[D].河北经贸大学,经济法学,2012,硕士.
[47]解广亚.BiScO_3基陶瓷制备及性能研究[D].哈尔滨工业大学,凝聚态物理,2014,硕士.
[48]霍鑫,郑凯,姚郁.基于非光滑线性Lipschitz连续平面的滑模控制设计[J].控制与决策,2009,11:1719-1722+1728.
[49]李云杰.室内装饰材料运用的实用性探讨[J].艺术科技,2013,12:408.
[50]杨乐.湖北少数民族地区农村反贫困研究[D].湖北民族学院,民族学,2013,硕士.